Prueba de esterilidad I

Medios de cultivo y soluciones

La prueba de esterilidad tiene fundamento en la detección de formas viables de microorganismos, en medios de cultivo adecuados para el crecimiento de bacterias, hongos y levaduras que se encuentran como contaminantes en productos estériles.

Recomendaciones especiales para la prueba de esterilidad

Para evitar una contaminación accidental la prueba debe llevarse a cabo en condiciones asépticas por lo que periódicamente se realizará el control ambiental de las áreas de trabajo, así como del equipo y material empleados. Los envases de las muestras deben desinfectarse previamente a su análisis. A los  productos envasados al vació, se les debe introducir aire filtrado a través de algodón estéril. Si el producto tiene diluyente o algún aplicador anexo, también debe cumplir la prueba de esterilidad. Se debe llevar a cabo una prueba en blanco como testigo, paralela a los análisis de las muestras.

Pruebas de esterilidad en medios de cultivo y soluciones

Prepararlos medios de cultivo a partir de medios deshidratados comerciales o preparados en base a sus formulaciones. Ajustar el pH con soluciones 1N de hidróxido de sodio ó 1N de ácido clorhídrico para que después de esterilizar en autoclave se obtenga el valor indicado en cada caso. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos.

Medio A. Medio fluido de cioglicolato

Mezclar los ingredientes hasta que estén completamente disueltos en agua, calentar si es necesario. Ajustar el pH, calentar nuevamente sin hervir y filtrar a través de papel filtro humedecido. Añadir la solución de resarsurina de sodio y envasar en tubos adecuados. Esterilizar. El medio presenta coloración rosa superficial por la oxidación del mismo, la cual no debe rebasar la tercera parte del volumen total; si la coloración es mayor, se puede calentar una vez en baño de agua hasta que la coloración desaparezca. Usarse cuando la coloración se reestablezca a la décima parte del volumen total del medio.

Medio B. Medio fluido de tioglicolato con  polisorbato 80

Preparar el medio como lo realiza para el medio A adicionar por cada litro de medio 50mL de polisorbato 80. Esterilizar.

Medio C. Medio Fluido de tioglicolato con penicilanasa

Preparar el medio como se indica en el medio A. A cada tubo de medio estéril  adicionar suficiente penicilinasa estéril para inactivar la penicilina presenten la muestra.

Medio D. Medio fluido de tioglicolato con polisorbato 80 adicionado de penicilinasa

Preparar el medio como indica medio B. A cada tubo con medio estéril, adicionar suficiente penicilinasa para inactivar la penicilina presente en la muestra.

Medio E. Caldo soya tripticaseína

Disolver los ingredientes en 500mL de agua, calentando suavemente hasta que la disolución sea completa  y llevar ala aforo a 1000mL. Ajustar el pH, filtrar y envasar en tubos adecuados. Esterilizar.

Medio F. Caldo soya tripticaseína con polisorbato 80

Preparar el medio como se indica en el medio E. Adicionar 5 ml de polisorbato 80 por cada litro de medio.

Medio G. Caldo soya tripticaseína con penicilinasa

Preparar el medio como se indica en Medio E. Adicionar la cantidad suficiente de penicilinasa para inactivar la penicilina presente en la muestra.
Medio H. Caldo soya tripticaseína con polisorbato 80 adicionado de penicilinasa.
Preparar el medio como se indica en medio F. A cada tubo con medio estéril adicionar suficiente penicilinasa estéril para inactivar la penicilina presente en la muestra.

Solución I. Solución al 1% de peptona

Disolver un gramo de digerido péptico de tejido animal en 1000mL de agua destilada, filtrar y ajustar el pH a 7.1±0.2, Distribuir en envases conteniendo 100mL cada uno y esterilizar.

Solución II. Solución al 1% de peptona con polisorbato 80

Preparar la solución como se indica en I. Agregar 1mL de polisorbato 80 por cada litro de solución. Envasar y esterilizar.

Solución III. Solución al 0.85% de cloruro de sodio

Disolver 8.5g de cloruro de sodio en agua destilada y llevar al aforo a 1000mL; distribuir en envases conteniendo 100mL cada uno y esterilizar.

Solución IV. Solución de peptona y extracto de carne con polisorbato 80

Disolver los ingredientes en agua destilada, llevar al aforo a 1000mL, ajustar el pH, envasar y esterilizar.

Solución V. Solución de penicilinasa

Preparar la solución de penicilinasa y valorarla en unidades Levy. Esterilizar la solución de penicilinasa por filtración a través de membrana.

Solución VI. Meristato de isopropilo

Utilizar meristato de isopropilo esterilizado por filtración a través de membrana con pH del extracto acuoso de 5.5 o mayor. Determinar el pH del extracto acuoso y envasar en frascos estériles.

Como se puede observar es crítico que los medios estén estériles, lo que se hace mediante esterilización por calor húmedo en la mayoría de los casos, razón por la cual la autoclave debe estar funcionando correctamente, en ICLAB contamos con personal calificado y apto para realizar pruebas de calibración, ajuste y validación de esterilización por éste método.

Instrumentos Científicos y de Laboratorio (ICLAB) es una empresa dedicada a la calibración de instrumentos de medición tales como: espectrofotómetros, potenciómetros,  viscosímetros, balanzas, básculas, manómetros, entre otros.

El personal de ICLAB está ampliamente capacitado para dar un servicio y asesoría a la mayoría de los instrumentos existentes en el mercado.

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La calidad y trazabilidad el suero fetal bovino

El suero fetal bovino (SFB) es derivado de sangre recolectada asépticamente usando bolsas plásticas estériles en mataderos con inspección oficial ante y post mortem. El SFB es separado mediante centrífugas refrigeradas y envasado en contenedores estériles y colocados en cámaras de congelación a -20 º hasta su exportación para ser sometido a una serie de pruebas de eficiencia y controles adicionales de calidad, para luego ser seleccionado, filtrado y envasado, manteniendo su integridad.

Uno de los aspectos relevantes del proceso es garantizar la trazabilidad del producto desde su origen

La trazabilidad es relevante para la determinación del riesgo potencial derivado de la ocurrencia de enfermedades de origen animal. problema. El origen del SFB, por sí mismo, es irrelevante en términos del desarrollo de células cultivadas, pero sí lo es en términos del posible efecto detrimental sobre las células que se cultivan (efectos citopatogénicos) o representar, por deficiente manipulación, un riesgo de contaminación de otros animales.

Los aspectos relevantes en cuanto a la calidad no tienen una relación directa con la calidad inherente del suero sino mas bien con factores contaminantes externos, tales como agentes patógenos u otras substancias exógenas. Por eso no tiene sentido intentar establecer una correlación entre los aspectos de origen geográfico y los de funcionalidad del suero, salvo los relativos a contaminación externa o derivados del estado de salud de la madre.

La calidad del SFB se define fundamentalmente en función del comportamiento de una línea celular específica en medio de cultivo que contenga dicho suero. Un lote de suero que funciona bien para una línea celular podría no funcionar bien con otra línea celular (y viceversa). Existen miles de líneas celulares diferentes; no existen dos lotes de SFB que sean idénticos. Es por esto que con mucha frecuencia los clientes adquieren SFB sólo después de haber ensayado una muestra del mismo.

Proveedores de suero fetal bovino

A continuación le presentamos a Mayimex S.A. de C.V., proveedor de suero fetal bovino:

Mayimex S. A. de C. V., es líder en México en la producción y la exportación del Suero Fetal Bovino (SFB), con amplia disponibilidad de materia prima (sangre fetal) y perfil tecnológico avanzado, a través de una estrecha colaboración con Sera-Scandia A/S y Biowest, líderes europeos en la recolección, procesamiento y comercialización de sueros filtrados, y también con otros clientes internacionales.

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¿Qué es el SFB y su aplicación?

¿Cómo se produce el suero fetal bovino (SFB)?

¿Qué es la Natamicina?

Los antibióticos, producidos por microorganismos o sintéticos, inhiben a los microorganismos en grandes diluciones. Como consecuencia del gran éxito terapéutico de los antibióticos en las enfermedades bacterianas, era natural que se ensayasen como conservadores frente al deterioro microbiano de los alimentos. Estos ensayos se realizaron entre 1945 y 1960 y la mayoría de los antibióticos se comprobaron en múltiples alimentos perecederos de todas las formas imaginables. A medida que fue aumentando el miedo a los microorganismos resistentes a los antibióticos fue disminuyendo el empleo de los antibióticos como conservadores de los alimentos. En las industrias que procesaban carne de aves se observaron desarrollos de bacterias resistentes a los antibióticos corrientemente utilizados. Por lo tanto se vio muy pronto que el empleo corriente de antibióticos como conservadores alimenticios podía convertirlos en ineficaces debido a que se habían seleccionado floras alterantes resistentes a los mismos. Los dos antibióticos más importantes empleados en muchos países con fines conservadores alimenticios son la natamicina y la nisina.

La natamicina (llamado antes pimaricina) es un antibiótico originado por streptomyces natalensis; su principal efecto es antifúngico y está permitido en algunos países. In vitro inhibe el desarrollo de hongos productores de anatoxinas en maníes crudos triturados. Ello constituye una ventaja considerable, lo que para algunos expertos sería suficiente para superar cualquier objeción acerca del empleo de este antibiótico en los alimentos. Para embutidos, concentraciones de natamicina de unas 1000 ppm permitieron que se conservaran bien, sin sufrir ataques fúngicos. El antibiótico puede aplicarse con salmuera, baños o en forma de "spray" y el embutido puede realizarse en diferentes tipos de tripas. Este tratamiento determinó una concentración superficial de 2 ppm/cm2 que se consideró que no tenía importancia toxicológica. Probablemente la aplicación más importante de la natamicina es para tratar la corteza del queso, tanto blando como duro, por inmersión en baños, o rociándolo con suspensiones de 500 ppm de natamicina. El antibiótico puede detectarse en la corteza y su penetración varía de acuerdo con el tipo de queso. También se empleó la natamicina en las películas para envolver queso; su efecto conservador se pierde si se aplica después de desarrollado el micelio. Ciertos mohos, (p. ej. Aspergillus flavus) producen enzimas que inactivan la natamicina.

Descripción detallada: La pimaricina es un prototipo molecular de los macrólidos polienos glicosilados, importante para la terapia antifungica y una promesa de futuro por su actividad antiviral, su capacidad de estímulo de la respuesta inmune, y su acción en sinergia con otras drogas antifúngicas o compuestos antitumorales.

Es producida por Streptomyces natalensis y ampliamente utilizada en el sector alimenticio para prevenir la contaminación por hongos tanto de quesos como de otros alimentos no estériles (carnes curadas, salchichas, etc). Debido a su extremadamente baja toxicidad en células de mamífero se ha venido utilizando durante más de una década como un conservante alimenticio autorizado tanto por la Unión Europea (aditivo E235), como por la "Administración de Alimentos y Drogas" de los E.E.U.U. (FDA) para preservar los alimentos de su contaminación por mohos y por lo tanto de los posibles riesgos inherentes a la ingestión de micotoxinas.

Varias cepas superproductoras de pimaricina de Streptomyces natalensis han sido obtenidas como resultado de un programa de mejora de cepas (mutación y selección clásicas).

La tecnología para producir el antifúngico mediante el uso de cultivos líquidos de cepas superproductoras de Streptomyces natalensis también ha sido desarrollada. La transferencia de tecnología incluye cepas superproductoras y los conocimientos técnicos del proceso de fermentación.

La pimaracina es un antibiótico producido por las bacterias: Streptomyces natalensis y S. chattanoogensis .

Función y características:
Usada como conservante, principalmente contra los hongos. La pimaricina se utiliza como agente antifungico para proteger quesos contra la contaminación por hongos filamentosos (mohos). Su baja solubilidad la hace muy apropiada para su uso en el tratamiento superficial de quesos duro y de fiambres.

Productos:
Quesos, (superficie exterior de los) productos cárnicos, etc.

Ingesta diaria admisible:
Máximo 0.3 mg/kg de peso corporal.

Efectos colaterales:
Es metabolizada por el hígado y excretada. No hay ningún efecto colateral en las concentraciones usadas.

Restricciones dietéticas:
Ninguna - la pimaracina puede ser consumida por todos los grupos religiosos y los vegetarianos (estrictos y no estrictos).

Cortesía de Globe Chemicals S.A. de C. V.